最近在做人血基因组PCR,目的是扩增一段500bp的基因,说起来是个很简单的实验,但是就是得不到500bp的长度,每次做都只有100bp。。用的试剂是Takara的预混好的PCR mix,50ul的反应体系。。
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请教哪位牛人问题到底出在哪里。。。
最近在做人血基因组PCR,目的是扩增一段500bp的基因,说起来是个很简单的实验,但是就是得不到500bp的长度,每次做都只有100bp。。用的试剂是Takara的预混好的PCR mix,50ul的反应体系。。
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请教哪位牛人问题到底出在哪里。。。
程序不太会有问题。我的建议是:
1. 用不同温度做梯度P一下,看看是不是引物退火温度与计算的有差别。
2. 你用的模板是什么?引物加了多少?少加一点模板,少加一点引物试试。
3. 如果都不行,估计就要换引物了。
欢迎探讨。