组织与细胞rt-pcr步骤有区别吗

答案:2 悬赏:40 手机版

解决时间 2021-02-20 16:28

提问者网友：低吟詩仙的傷
2021-02-19 23:31

组织与细胞rt-pcr步骤有区别吗

最佳答案

五星知识达人网友：风格不统一
2021-02-20 00:29

首先同一种物质在肿瘤细胞系和肿瘤组织中的表达有可能存在差别。另外，组织RNA比较容易降解，RT-PCR结果不好，可能跟RNA提取的浓度及纯度有很大关系。建议先将新鲜组织经液氮冻存后再提取，提组织RNA的东西比如研钵，镊子等都要200度干烤2小时去除RNA酶。你的RT-PCR结果不好，有可能是你提取的组织RNA不纯，或者RNA降解了。

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1楼网友：低音帝王
2021-02-20 00:41

理论上50个cell就可以，但是实际操作中我只看到过牛人从100个cell里面提出来过（用lcm逮的），自己提弄过1000cell的。没有用kit。不同点是用bcp代替氯仿，并且加糖原助沉淀，具体的好处不是很清楚，但是bcp用量小，而且在cell少的情况下，使用糖原可以尽量的降低误操作。由于细胞的大小，rna量以及你作用时间的差别，不同细胞在抽提rna的量不一致，初作rna提取时一般选择6孔板（或35mm版）做，每孔1.5-2ml，这样你的作用药品不用使用很多，rna提取的量也有保证。以hela 为例，接种量在50万左右，待细胞长到90%时加药品（加入时间一般以你的作用时长为基点，估计到收集时长满），一般提取rna作用时间不会太长，几个小时而已，所以细胞应长得接近饱和时加入药品，之后收集细胞，提取rna步骤就一样了，提取的一孔rna在10-20ug，这些已足够rt使用，具体提取方法站内有许多，搜索就可以了。

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