如何验证目的基因和内参基因的扩增效率一致

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解决时间 2021-03-17 08:35

提问者网友：夢醒日落
2021-03-16 17:52

最佳答案

五星知识达人网友：底特律间谍
2021-03-16 18:46

如何验证目的基因和内参基因的扩增效率一致
内参基因和待测基因本来就不一样。

扩增曲线和溶解曲线不是一个概念。扩增曲线是每扩增一个循环，测量一次荧光强度。这个由底物的浓度和扩增效率所决定。目的基因和内参的浓度肯定不同，而且引物的序列不同，扩增效率也可能不一样，所以两者的曲线肯定有可能不一样。

SyberGreen PCR，溶解曲线是PCR完成以后，对产物逐步加温，测量荧光强度的变化，而不是荧光强度本身。DNA双链在温度达到TM附近时，发生大量的解离，荧光强度的变化最大，出现峰值。这个峰值的位置是由PCR产物的TM值所决定的，和PCR产物的序列，GC比例有关。所以内参基因和目的基因的峰值肯定是不一样的。

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1楼网友：一叶十三刺
2021-03-16 18:52

怎样验证目的基因和内参基因的扩增效率一致相对定量有两种方法.要求扩增效率相同的是δδct法,因为只有扩增效率相同目的基因与内参基因的ct值之差才是恒定的值,这是使用这种方法处理数据的前提,所以正式实验之前要进行条件优化,这种方法的优势是不用作标准曲线.如果扩增效率不同就要用另一种双标准曲线法,这种方法需要标准品,稀释不同的浓度梯度,作标准曲线,根据标准曲线得到你的拷贝数在进行数据处理,得到相对值.

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