应用去DNA试剂盒 gDNA eraser，最终PCR产物用两条带，问题出在哪个步骤?

答案:2 悬赏:80 手机版

解决时间 2021-01-28 15:14

提问者网友：蓝琪梦莎
2021-01-28 01:28

最佳答案

五星知识达人网友：独钓一江月
2021-01-28 02:34

你这个说的不是很清楚啊，你的意思是你去扩增质粒上的片段，先去除了一下gDNA，然后PCR，结果多了一条带？
这种条带变多原因很多，你之前一条带的时候是什么条件做的？是扩增纯质粒么？如果是的话那么现在这个情况可能是试剂盒效果不好，有gDNA污染，发生非特异性扩增了。或者是PCR条件变化了，发生非特异性扩增。追问扩增的不是质粒，是cDNA追答cDNA的话有可能是发生非特异性扩增了，你可以把大小正确的那条带回收了作为模板再PCR一次，然后看扩增出来的产物对不对。这个应该和试剂盒没什么关系

全部回答

1楼网友：怙棘
2021-01-28 03:59

1、是不是引物特异性有问题呢？要不做PCR的时候加点儿温度？
2、你可以从条带大小大致确定是不是基因组是不是没去干净~~~如果是的话，那就重新反转录三，记得消化干净哦~~~
还有就是你的条带是用来做什么的呢？要不回收需要的条带做个测序？

我要举报

如以上回答内容为低俗、色情、不良、暴力、侵权、涉及违法等信息，可以点下面链接进行举报！

点此我要举报以上问答信息

应用 去DNA试剂盒 gDNA eraser，最终PCR产物用两条带，问题出在哪个步骤?

应用去DNA试剂盒 gDNA eraser，最终PCR产物用两条带，问题出在哪个步骤?