通过设计带酶切位点的PCR引物来使目的片段添加限制性酶切位点的原理是什么？百思不得其解，请教各位！

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解决时间 2021-03-19 13:14

提问者网友：送舟行
2021-03-18 20:25

我的意思是说引物人为添加上的酶切位点与要扩增的片段也不匹配，怎么能随着引物克隆到目的片段上，而使目的片段带上酶切位点的序列呢？原理是什么呢？

最佳答案

五星知识达人网友：人類模型
2021-03-18 21:15

不是随意添加。酶切位点都加在引物的5‘端。这样在第一轮扩增后，就会产生有酶切位点的产物了(酶切位点在产物的两端）。在接下来的扩增中每个产物就都会有了。PCR的时候可以耐受引物的5‘端由数个不匹配的碱基对。但是随着扩增的进行，产物都有这些位点后，就不存在不匹配的问题了

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1楼网友：一把行者刀
2021-03-18 23:57

我要知道就好了

2楼网友：逐風
2021-03-18 22:58

不是随意添加。酶切位点都加在引物的5‘端。这样在第一轮扩增后，就会产生有酶切位点的产物了(酶切位点在产物的两端）。在接下来的扩增中每个产物就都会有了。pcr的时候可以耐受引物的5‘端由数个不匹配的碱基对。但是随着扩增的进行，产物都有这些位点后，就不存在不匹配的问题了

3楼网友：深街酒徒
2021-03-18 21:51

原理很简单，因为PCR扩增出来的产物都是你加进去的引物延伸出来的，所以PCR产物上都带你加进去的酶切位点。Btw：虽然你觉得你加进去的引物量很少，但是你可以算一下，你加进去了多少mol的引物，再用这个量乘以你的PCR目的产物的分子量，就可以知道你理论上能等到的产物的量了。所以一般pcr反应体系里加入的引物的量都是过量的。

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