基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆
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解决时间 2021-10-13 17:55
- 提问者网友：且恨且铭记
- 2021-10-13 04:41
基因克隆有哪些步骤，如何筛选阳性克隆
最佳答案
- 五星知识达人网友：未来江山和你
- 2021-10-13 05:43
简单的说一下：扩增目的基因，比如通过PCR的方法。PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒。转染大肠杆菌筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法，就是在载体上，序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列，如果不被破坏，产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物，形成蓝色产物。如果有目的序列插入，这个酶就不能表达，形成的克隆就是白色的。挑取阳性克隆，测序确认无变异和方向后，扩增质粒，提纯质粒。
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