动物源性荧光PCR检测过程中需注意的问题？

动物源性荧光PCR检测过程中需注意的问题？

由于分子检测荧光探针法的灵敏度非常高，故在实验操作过程中，为防止样品交叉污染及扩增产物的污染，需注意以下事项：
1. 严格取样。取样需要按照取样规程来，做到专物专用（如取样袋、剪刀等），禁止一物用在多个样品上。
2. 分区操作。需把样品处理、配液分装、PCR扩增，这三个过程分开，在不同的区域的操作。
3. 减少操作步骤，降低污染几率。可把试剂反应液先分装成20ul 的小管（PCR管，一次分装不宜过多，以一周用完为宜），严格-20℃保存；用时把分装好的小管拿出加入模板即可。
4. 清洁实验环境，减少阳性残留。每次使用完的台面、超净台或者生物安全柜都需及时清理，酒精擦拭、紫外照射。有条件的话，实验区要保持换气。
5. 扩增产物处理。分子检测的环境污染大部分都是扩增产物的气溶胶污染；对于扩增产物要做到：1）尽量不开盖；2）及时处理，丢弃时需放入密封袋中密封好再处理。
6. 实验工具的定期清洁。实验服、移液枪等都需定期清洗。
7. 勤换手套。样品前处理完后，需换新的手套进行配液操作。
8. 严格按照说明书中的注意事项进行操作。

个体的差异如果和实验的差异相当的话...你的数据是不能用的..至少是不可靠的... 可以采用几个不同的内参基因分别做比较看看...如果都是这样的话..那结果就是个体差异而不是实验的..

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