我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的条带就可以了吧？

答案:4 悬赏:40 手机版

解决时间 2021-01-26 20:33

提问者网友：聂風
2021-01-26 02:17

最佳答案

五星知识达人网友：末日狂欢
2021-01-26 02:34

菌液PCR有风险，因为PCR是有一个级联放大的效应在里面，只要在菌液中沾了一点转化时用的核酸片段，就有可能会扩增出来。但是送去测序的时候，很可能是假阳性，没有连入任何片段（以前我们就碰到过这种情况，而且还是通过蓝白斑筛选的）。
如果实在没有IPTG和X-gal，也最好能先挑几个单菌落去做菌落PCR，从中选取阳性的菌落去做液体摇菌，提质粒，找一个目标判断上有的酶做一个单切，同时用自连的空载作为对照，看是否能够切开。如果菌体克隆切开了，空载切不开，才能说明找到了阳性克隆。送去测序才比较可靠。
否则直接送去测序，很可能全是空载，白白耽误时间。
为了节省时间，也可以先送去测序，等待测序的过程中，进行酶切验证，对了更好，不对赶紧找其他的菌去送样。

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1楼网友：纵马山川剑自提
2021-01-26 05:32

既然能扩出来就直接往下做

2楼网友：轮獄道
2021-01-26 05:07

保险起见，提个质粒，做个酶切。当然咯，现在测序已经很便宜了！

3楼网友：一叶十三刺
2021-01-26 04:13

可以的，菌液PCR如果条带正确也是可以的

没加IPTG和X-gal的话就分不清是否是空载体还是已经转入基因了

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