用芦丁测总黄酮含量的时候,含量测定方法的考察是什么啊?我只有20mg芦丁,不敢乱用.

用芦丁测总黄酮含量的时候,含量测定方法的考察是什么啊?我只有20mg芦丁,不敢乱用.

芦丁标准品（中国药品生物制定检定所）；95%乙醇；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等试剂,所用试剂均为分析纯；山楂.2 实验部分2.1对照品及供试品溶液的制备2.1.1 对照品溶液的制备 精确称取芦丁对照品0.005g,置于小烧杯中,用体积分数70%的乙醇溶解并定量转移至25mL容量瓶中定容,摇匀,即得浓度为0.200mg/mL的芦丁标准品溶液.2.1.2 供试品溶液的制备 称取干燥至恒重的山楂5.0g,置于100ml带塞锥形瓶中,按实验设计条件进行超声提取,提取液减压抽滤,取其滤液.将滤液定量转移至50ml容量瓶中,加相同浓度的乙醇定容至刻度,摇匀即得.2.2 总黄酮含量测定方法的建立2.2.1 测定波长的选择 精密量取芦丁对照品溶液1.50ml,置于10ml容量瓶中,加入体积分数70%乙醇至5ml.加5%亚硝酸钠溶液0.30ml,摇匀,放置6min；再加入10%硝酸铝溶液0.30ml,摇匀,放置6min；加入1.0mol/L的氢氧化钠溶液4.00ml,加水至刻度,摇匀,放置15min.以不加芦丁对照品溶液作为空白.选择于紫外分光光度计在400nm-600nm波长范围内扫描.2.2.2 线性实验 精密量取芦丁对照品溶液0.00mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL,分别置于25mL容量瓶中,各加入体积分数70%乙醇至10ml.加5%亚硝酸钠溶液1.00mL,摇匀,放置6min；加10%硝酸铝溶液1.00mL,摇匀,放置6min；加4%氢氧化钠溶液10.00mL,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,放置15min.以不加芦丁对照品溶液为空白,采用分光光度法在510nm波长处测定吸光度,以芦丁浓度(mg/ml)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,绘制标准曲线.2.2.3 精密度实验 准确吸取芦丁对照品溶液2.00ml,置于10ml的容量瓶中,加入一定量体积分数70%乙醇使成5mL.先加入5%的亚硝酸钠溶液0.30mL,摇匀,放置6min；再加入10%的硝酸铝溶液0.30mL,摇匀,再放置6min；加1.0mol/L的氢氧化钠溶液4.00mL,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,放置15min.按以上方法连续测六次.2.3 样品中黄酮的用优化后的方法提取中黄酮,用比色法测定其含量即可.

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