比较elisa和facs的异同点

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FACS分选CD4+CD25 + T 细胞需要具分选功能的流式细胞仪.而且保证无菌的操作环境.

MACS分选CD4+CD25 + T 细胞方法:

CD4+CD25+T细胞分选实验步骤

1、  样品准备

研磨淋巴结和脾脏组织，获得单细胞悬液，其中，淋巴结组织无需红细胞裂解液处理，脾脏细胞需要红细胞裂解液处理，并用缓冲液洗涤两次。

2、  标记非特异性CD4+T及荧光标记CD25

2.1 细胞计数，离心：1000rpm，3min

2.2 40ul Buffer/107细胞

2.3 10ul 混合抗体/107细胞

2.4 充分混合，4-8℃，孵育10分钟

2.5 加30ul Buffer，20ul Anti-biotin microbead 和10ul CD25-PE/107细胞

2.6 混合后再孵育15分钟（避光）

2.7 1-2ml Buffer洗涤，离心

2.8 500ul/1025*108重悬，过LD柱子

3、  LD柱子分选

3.1 固定LD柱子

3.2 2ml Buffer润湿柱子

3.3 加入细胞悬液

3.4 收集流出柱子的细胞，1ml Buffer洗涤两次，收集流出液体。

3.5 取下柱子，在另一管中打入柱子上结合的阴性细胞

4、  标记CD4+CD25+T 细胞

4.1离心CD4+T细胞

4.2 90ul Buffer/107细胞

4.3 10ul Anti-PE Microbead/107

4.4 混合细胞，避光孵育15分钟（4-8℃）

4.5 500ul/108重悬

5、  阳性分选

5.1 MS柱子用500ul Buffer润湿

5.2 加细胞悬液

5.3 500ul Buffer洗涤3 次

5.4收集过柱子的细胞到非CD4+T细胞的管中。

5.5 取下MS柱子，获得CD4+CD25+T细胞

5.6 MS柱子重复分选一次？？

6、  细胞计数，培养

6.1 送激光共聚焦观察细胞表面CD25表达丰度

6.2 细胞计数后，每2*104细胞混合后加入200ul 96孔培养板，在培养72小时结束前6小时加入3H-TdR，送同位素检测。

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