科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：（1）步骤①和②中常用的工具酶是。（2）经过

科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答：

（1）步骤①和②中常用的工具酶是 。
（2）经过①和②步骤后，有些质粒上的 基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒。
（3）步骤③是 的过程。
（4）步骤④：将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选 。
（5）步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。含目的基因的菌落位于（选填“D”或“E”） 上。（1）限制性核酸内切酶 DNA连接酶（2分）
（2）氨苄青霉素抗性基因
（3）将重组质粒（目的基因）导入大肠秆菌（受体细胞）
（4）含四环素抗性基因的大肠杆菌（含抗性基因的大杆菌给分，但回答含目的基因的大肠杆菌不给分）
（5）E（2分，每圈一个菌落1分）

(答案→)（1）限制性核酸内切酶 DNA连接酶（2分）（2）氨苄青霉素抗性基因（3）将重组质粒（目的基因）导入大肠秆菌（受体细胞） （4）含四环素抗性基因的大肠杆菌（含抗性基因的大杆菌给分，但回答含目的基因的大肠杆菌不给分） （5）E（2分，每圈一个菌落1分） 解析：本题考查基因工程操作步骤的相关知识。（1）步骤①和②是基因工程的第二步，将目的基因与运载体充足形成重组的运载体。需要的工具酶有剪刀和针线，即限制性内切酶和DNA连接酶。（2）经过①和②步骤中由图知外源目的基因插入在抗氨苄青霉素基因的中间，形成重组质粒，由于目的基因的分隔使得该抗氨苄青霉素失活。（3）步骤③是将重组质粒导入到锥形瓶的大肠杆菌中，即使将重组的质粒导入受体细胞的过程。由于运载体不是噬菌体，而是质粒，让质粒进入大肠杆菌细胞内中，一般用CaCl2溶液增大大肠杆菌的通透性。（4）步骤④到含四环素的培养基C上培养，有抗四环素的就能生存下来，没有抗四环素的就不能。这样就可以筛选抗四环素的大肠杆菌。能存活的有两种：普通质粒（抗性基因没有被破坏）和目的基因不在抗四环素基因的中间插入的。（5）步骤⑤：用无菌牙签桃取C上的单个菌落，分别接种到C（含氨苄青霉素和四环素和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，在C上存活的是普通质粒两个抗性基因都没被破坏，在E上存活的是只要抗四环素基因没有被破坏就可以。由步骤①和②知，目的基因与质粒重组，插入的位置在抗氨苄青霉素中间，因此抗氨苄青霉素的功能没有，抗四环素基因没有破坏，具有抗四环素的抗性。因此选E，在C图中没有的两个点能在E图中出现的便是。

我明天再问问老师，叫他解释下这个问题

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