fitc标记蛋白，怎样检测有没有标记上
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解决时间 2021-11-17 13:18
- 提问者网友：贪了杯
- 2021-11-16 21:26
fitc标记蛋白，怎样检测有没有标记上
最佳答案
- 五星知识达人网友：逃夭
- 2021-11-16 21:37
FITC溶解甲醇或DMSOFITC量应少量mg/ml级避光反应24 h注意事项应该用铝箔保护反应器避光提纯产物我用透析先用PBS 7.4 透用超纯水透36差
意见仅供参考
Procedure of Labeling Protein with FITC
1. Preparation before experiment:
1) 配100mL0.1M PH=8.5SB缓冲液(0-5℃保存且超周现配现用)；
2) 准备A,B,C,D四石英比色皿；
3) 取容量瓶事先用锡箔纸其完全包住避光；
4) 用超纯水注满D=15mmL=300mm柱层析离吸附柱夜浸泡同检测其否漏液第二再用PBS浸泡7-8h；
5) 用DIW浸泡葡聚糖Sephadex G-50夜(1g Sephadex G-50配5mLDIW)使其溶胀打孔状结构；
DIW倒掉注入适量PBS(PH=7.4)用锡箔纸盖防灰4℃保存；
注：(1) Sephadex G-50量完柱层析离吸附柱剩余部加入 0.02%(m/v)NaN3防止细菌保存于4℃冰箱；
(2) Sephadex G-50第配反复使用应做相应处理(见)；
(3) Sephadex G-50离范围：1000-30,000(量)
2. 计算Protein游离-NH2配制1.0mg/mL Protein/SB蛋白溶液：
BSA, Fraktion V Mw=67000Da, Arg 26; lys 60;
20mg BSA; 2mLSB(0.1M PH=8.5)；
游离-NH2：n1=20×0.001g×(26+60)/( 67000g.mol-1) =2.57×10-5mol；
溶于容量瓶(外包锡箔纸避光处理)加搅拌搅拌使其完全溶解；
注：组蛋白质20氨基酸仅Arglys侧链游离-NH2
意见仅供参考
Procedure of Labeling Protein with FITC
1. Preparation before experiment:
1) 配100mL0.1M PH=8.5SB缓冲液(0-5℃保存且超周现配现用)；
2) 准备A,B,C,D四石英比色皿；
3) 取容量瓶事先用锡箔纸其完全包住避光；
4) 用超纯水注满D=15mmL=300mm柱层析离吸附柱夜浸泡同检测其否漏液第二再用PBS浸泡7-8h；
5) 用DIW浸泡葡聚糖Sephadex G-50夜(1g Sephadex G-50配5mLDIW)使其溶胀打孔状结构；
DIW倒掉注入适量PBS(PH=7.4)用锡箔纸盖防灰4℃保存；
注：(1) Sephadex G-50量完柱层析离吸附柱剩余部加入 0.02%(m/v)NaN3防止细菌保存于4℃冰箱；
(2) Sephadex G-50第配反复使用应做相应处理(见)；
(3) Sephadex G-50离范围：1000-30,000(量)
2. 计算Protein游离-NH2配制1.0mg/mL Protein/SB蛋白溶液：
BSA, Fraktion V Mw=67000Da, Arg 26; lys 60;
20mg BSA; 2mLSB(0.1M PH=8.5)；
游离-NH2：n1=20×0.001g×(26+60)/( 67000g.mol-1) =2.57×10-5mol；
溶于容量瓶(外包锡箔纸避光处理)加搅拌搅拌使其完全溶解；
注：组蛋白质20氨基酸仅Arglys侧链游离-NH2
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