怎么对提取质粒进行鉴定？

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解决时间 2021-02-23 13:06

提问者网友：ミ烙印ゝ
2021-02-23 03:00

怎么对提取质粒进行鉴定？

最佳答案

五星知识达人网友：独钓一江月
2021-02-23 03:37

首先跑一个琼脂糖凝胶电泳，观察一下带型和大小是否符合，然后根据质粒所含有的酶切位点，选择合适的限制性内切酶进行单酶切或双酶切，观察酶切后的条带数和大小是否与理论一致。追问如果质粒上有很多酶切位点的话，还需要选所需的限制酶，这个是怎么选的啊大侠。追答选一个你的质粒全序列中只有1个或2个酶切位点的酶即可，如果很多，从中挑一个你手头上有的酶，或者常用二便宜的酶。追问我是说必须选两个能把目的基因切下来的酶吗？关键是切下来电泳看的片段具体也看不出多少bp，只能看个大概，这样检测总感觉不准。刚刚研一，很多都很迷惑。非常感谢您能不吝赐教。追答这要看你鉴定质粒的目的，如果是为了鉴定外源基因是否插入到质粒中，你必须选你插入序列PCR扩增时引物上设计的酶切位点相应的酶切。
重组质粒的鉴定常用有3种方法：PCR、酶切和测序，前两者简单快速，后者则最为准确，如果你下一步试验是做外源基因的表达，那最好测一下序。

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1楼网友：毛毛
2021-02-23 05:29

DNA分子杂交技术（放射性同位素标记法标记一条单链DNA分子做探针，与待检测的质粒杂交）

2楼网友：毛毛
2021-02-23 04:36

PCR或者酶切。

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