为什么菌液PCR引物一个载体上的一个是PCR片段上的鉴定正确后测序却完全不同？信号中断？

答案:2 悬赏:70 手机版

解决时间 2021-10-19 02:33

提问者网友：龅牙恐龙妹
2021-10-18 15:35

另一次PCR是原片段引物的，也是正确条带；回答假阳性的都扯淡，是菌里构建好的载体模板不纯？肯定有正确的连接，但是不是混有其他的条带？同样的情况，另2个菌液测序就正确~怎么解释？...

另一次PCR是原片段引物的，也是正确条带；
回答假阳性的都扯淡，是菌里构建好的载体模板不纯？肯定有正确的连接，但是不是混有其他的条带？同样的情况，另2个菌液测序就正确~
怎么解释？

最佳答案

五星知识达人网友：何以畏孤独
2019-09-25 11:03

是定向克隆粘末端连接？如果不是有连接反了的可能再有一种可能就是送去测序的菌液有问题我有次是同样的片段测序，菌液没出来，用测序引物PCR的产物测序就合适了，可能菌液污染了

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1楼网友：怙棘
2021-03-26 11:11

是不是引物特异性问题…… 能做载体PCR的话试试也许就对了，或者提高退火温度试试。

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