细菌的纯种分离和接种技术注意事项有哪些

细菌的纯种分离和接种技术注意事项有哪些

细菌的纯种分离和接种技术中，需要注意的事项有：
1）稀释度的问题
纯种分离的时候，无非是把菌液稀释一定梯度后，涂布在诸如LB培养基上。如果没有稀释好，就会导致细菌长得太密，或者是细菌根本不长。最优的稀释梯度是最后在平板上的菌落数在30至300之间。此时，能清楚地看清菌落的形态，便于挑取单菌落；

2）杂菌污染的问题
因为用于接种的一般都是营养丰富的有机培养基，这种培养基适合任何细菌生长。在操作过程中，空气和桌面上都会有大量看不见的细菌潜在。在分离和接种前，所有用到的器具和培养基必须在121摄氏度下灭菌20分钟至30分钟。在倒平板时，最好在培养基还是热的时候倒，以减少杂菌感染。所有的操作最好在超净工作台上完成。若没有超净工作台，那就拿两个酒精灯点燃，并用酒精擦拭桌面，在两个酒精灯之间操作。

综上，想要较好地分离和接种细菌，操作人员必须完全保证杂菌的感染，操作熟练，在温度和洁净度上做到最严格。

最主要的注意事项就是防止杂菌污染。
一般细菌都是接种在固体培养基上，细菌生长出菌落以便分离。接种的工作环境应该清洁卫生，一般在超净工作台内作业，接种时要注意将接种用的接种器放到酒精灯上烤一下，待接种器的温度降低后再挑取菌种。

细菌的纯种分离、接种技术需要注意的事项需从分离接种培养各环节说起。比如：1、取样：需要分菌的样品取样需指定严格的取样操作流程，并备好需要用的无菌采样器，确定取样地点取样素材。然后带好无菌采样器，在无菌操作下取样；如果现场无法做到无菌，至少需要做到不受取样素材意外的因素影响下取样。比如：去土壤，清理现场取样地的土壤，去除不需要的干扰杂质。取样后，运输过程需要无菌，低温；并尽快带回实验室，分菌；2.分菌过程：备好目标菌需要的分离培养基、培养皿、取样环、酒精灯、无菌操作台；将培养基灭菌后制无菌平板，在无菌操作台内无菌挑取采样素材或一定量融水后，用取样环挑取溶解后的水划线分菌；3.培养过程：划好线的平板，至于恒温培养箱在目标菌适宜生长温度下培养适宜时间，并定期看看菌是否长出，待长出合适大小菌落后，纯化；4、纯化：将长好目标菌的平板在无菌操作台内，用无菌取样环挑取典型单菌落，并在无菌平板上划线纯培。5、培养：直至目标菌出现统一、单菌落后，生化和测序鉴定，鉴定成功后保存。
即分离纯培结束。

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