双荧光素酶报告基因实验怎么转染目的和内参两种质粒

答案:2 悬赏:20 手机版

解决时间 2021-01-04 10:02

提问者网友：留有余香
2021-01-03 17:54

最佳答案

五星知识达人网友：深街酒徒
2021-01-10 05:47

（1）用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。
（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。
（3）筛选阳性克隆，测序。
扩增克隆并提纯质粒备用。

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1楼网友：煞尾
2021-01-10 06:11

因为内参需要的量很少，所以将质粒稀释后转染能够减小误差，这个是没有问题的，不过我们之前都是用无菌的双蒸水稀释的，depc水对细胞状态可能还是有一定影响的，其次你转染的时候要保证细胞密度。关于细胞的转染效率的话，在细胞种类和转染试剂固定的情况下，转染效率是一定的，您可以用该转染试剂将一个带荧光标签的质粒转入该细胞系，通过荧光观察确定细胞转染效率，如果效率低，建议您换转染试剂或细胞系，如果转染效率没有问题，建议您可以采取以下措施试一下：一是适当增加内参的量；二是加长转染时间。

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