T克隆出结果了，不知道怎么分析测序结果，怎么去除载体上的片段？

答案:2 悬赏:70 手机版

解决时间 2021-03-02 22:22

提问者网友：寂寞撕碎了回忆
2021-03-02 13:12

DNAMAN，DNAstar我都不太会用，有谁教教我啊？

最佳答案

五星知识达人网友：动情书生
2021-03-02 14:20

DNAMAN基本能够满足你的需要，我可以跟你分享个中文版的DNAMAN 手册，具体使用你自己研究哈，挺容易学的

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1楼网友：蕴藏春秋
2021-03-02 14:51

首先看你是做什么用了，做什么用很关键的，你如果想表达蛋白，那么重新克隆吧或者用点突变试剂盒，不过这个太贵。建议你克隆基因的时候选用高保真的酶，这样突变概率比较小。也不会比普通酶贵很多。如果克隆的顺利的话，应该很块的，实在是不想重新克隆，那做点突变也很耗时间，耗钱。也可以用突变pcr，选择高保真的酶做pcr扩增然后拼接，不过要注意真正的高保真pcr酶末端是完全没有a的，必须要做一步3‘加a的步骤才能克隆到t载体里，如果哪家忽悠他们的酶是高保真酶还能直接克隆到t载体里那这款酶要么根本就不是高保真酶，要么是高保真酶和taq的混合酶，理解了原理就不会那么容易被忽悠了。又或者多选择几个单克隆去测序。。。。如果是做敲除，构建重组载体，那大可不必。做了几次构建，都有相同的突变那大概就是模板突变了很简单的处理方法，分两段pcr，用引物修正突变位置，最后overlap在一起。直接把质粒p下来的点突变方法也ok，不需要买试剂盒，多看看相关文献和经验就行哈，，如有帮助，，万望采纳哦亲

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