PCR引物解链温度设计？

请教老师，“pcr中引物解链温度，两个引物的之间的Tm值班最好差2-5度”，我不明白，引物它是一段寡核酸链，它又不是一条完整的双链，哪里有解链温度啊，它不需要解链，怎样理解引物的解链Tm值班最好差2-5度。谢谢！

引物是单链的，但是PCR的过程中，引物跟模板结合的时候是双链嘛，退火的时候引物跟模板有一半的量解链的时候，其实还有一半的量是跟模板结合的，所以把这个温度作为引物的退火温度。

pcr引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板dna序列。 原则： 1、引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。 2、碱基要随机分布。 3、引物长度一般在15~30碱基之间。 4、引物gc含量在40%~60%之间，tm值最好接近72℃ 5、引物3′端要避开密码子的第3位 6、引物3′端不能选择a，最好选择t 7、扩增产物的单链不能形成二级结构 8、引物自身不能有连续4个碱基的互补 9、引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰 10、引物5′ 端和中间△g值应该相对较高，而3′ 端△g值较低 11、引物具有特异性 这是pcr的引物设计原则 具体你说的检测，是检测方法还是扩增产物分析或者其他什么内容？

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