请问菌落PCR有条带不亮但是分子量正确抽出的质粒分子量却在空载体附近是为何？

答案:2 悬赏:40 手机版

解决时间 2021-01-04 18:08

提问者网友：锁深秋
2021-01-03 19:18

引物用的是通用引物加基因特异的引物。

最佳答案

五星知识达人网友：神的生死簿
2021-01-10 05:56

通用引物加特异性引物菌落PCR+质粒双酶切均为阳性是最具特异性的证明（无缝拼接的除外）
个人认为双酶切实验能够更严谨的验证重组实验更具说服力的是基因组测序
不知道您的重组质粒是否酶切解环后与线性空载体进行比对因为琼脂糖凝胶电泳本身存在一定范围内误差若目的片段过小立体DNA结构在琼脂糖凝胶中误差放大可能影响实验结果
根据您的实验结果我猜测重组质粒阴性可能性更大一些
既然已经抽提质粒不妨做一下质粒PCR和双酶切样品在一块凝胶内平行跑样

结果一目了然

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1楼网友：拾荒鲤
2021-01-10 07:16

没看懂什么意思？

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请问菌落PCR有条带 不亮但是分子量正确 抽出的质粒分子量却在空载体附近 是为何？

请问菌落PCR有条带不亮但是分子量正确抽出的质粒分子量却在空载体附近是为何？