怎么设计扩全长的引物

怎么设计扩全长的引物

您应该使用巢式PCR来做这个实验。

无论您是先提RNA再做反转录，还是直接从DNA中获得基因，考虑到模板的复杂性，都应当使用巢式PCR。建议您先从目的基因的上下游设计一段引物，即外引物，再根据目的基因上下游设计一段内引物。

外引物不在目的基因上，可以在目的基因上下游100bp以内，这就可以利用引物设计找出最优秀的引物，提高了第一次PCR的成功率。将第一次PCR产物做模板，进行第二次PCR，这样如果P出了大小正确的条带，就可以肯定是你的目的条带。因为两次特异性扩增再加上大小正确，这样的总特异性是极高的。

另外，由于在第二次PCR过程中，模板是第一次PCR产物，成分单一，就是内引物再糟糕，也没有问题，这就规避了你提到的“那如果在CDS区两端设计不出引物怎么办？”这个问题。

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