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在DNA引物合成的报告单上Tm(1M Na+) 68.25 ; Tm 57.80 分别什么意思啊?请各位高手不吝赐教!多谢了!

答案:3  悬赏:10  手机版
解决时间 2021-03-24 17:46
  • 提问者网友:wodetian
  • 2021-03-24 09:30
在DNA引物合成的报告单上Tm(1M Na+) 68.25 ; Tm 57.80 分别什么意思啊?请各位高手不吝赐教!多谢了!
最佳答案
  • 五星知识达人网友:行路难
  • 2021-03-24 10:58
好吧,这个我来解释。

1楼其实很接近正确答案了。二楼则是完全错误的。

Tm(1M Na+) 68.25指在浓度为1M的钠离子溶液环境下该引物的退火温度是68.25℃;Tm 57.80指在纯水中该引物的退火温度是57.80℃

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先回答二楼的问题,Tm没有所谓“核酸值这个称呼”,Tm不是测定的退火温度这个是真实的,但是寡聚核苷酸的的理论Tm和实际Tm也差不了多少了。况且,如果是正常的引物,Tm一般就在50~70℃之间,你所说的能到90℃的引物,应该是特长GC特高的引物吧。还有,我见到过70℃+的引物,这时直接用两步法PCR就可以。

再回答楼主问题。报告里面的Na只是指在离子强度等同于1MNa盐存在时的Tm值,并不代表只能存在于Na溶液中。Mg的存在也是一种离子环境,二者可以相比较而已。

不同的引物Tm不同,正向引物和反向引物是两条不同的引物,Tm当然不同了。所以在设计引物的时候,两条引物的Tm不要差的太远,否则影响扩增效率。
全部回答
  • 1楼网友:雪起风沙痕
  • 2021-03-24 11:39
这两个引物在1mol/L钠盐形式下的退火温度是68.25℃和57.80℃
  • 2楼网友:北城痞子
  • 2021-03-24 11:18

楼上的 Tm值可不是退火温度噢 应该是primer的核酸值,只是我们平常做PCR的时候可以通过Tm值推算退火温度罢了 
呵呵 概念是概念,生物学需要实践,很多的引物Tm值都可能达到70、80,甚至90,难道你准备PCR的时候用这种温度退火? 
再说了,引物的Tm值高了,不是说提高退火温度就能P得出来。Tm值高代表GC含量高,特异性就不好,所以才衍生了Touchdown和Slowdown的方法。 
贴的图片是我随便找的张引物订单,是一条引物的,有两个Tm值是不同Na浓度的。还有不同引物的碱基序列不同,所以Tm不一样。当然也有可能恰好是相同的,那是碱基算出来的Tm值恰好相等罢了。 
别把无知当学问了,Primerbank里随便拎条定量引物出来Tm值都能很高,难道你跑定量也用两步PCR,还有你那两步PCR的方法都是哪个年代的技术了,P一次就能P出来的东西非得弄得那么复杂,你觉得做科研的人都很闲?拜托多学习学习国外先进技术,没事看看JoVE和Nature Protocol吧。
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