请教PKC活性如何测定
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解决时间 2021-01-27 02:39
- 提问者网友：沉默菋噵
- 2021-01-26 22:31
请教PKC活性如何测定
最佳答案
- 五星知识达人网友：一叶十三刺
- 2021-01-26 23:23
PKC 的检测PKC 的检测方法目前主要通过western Blot 分析,免疫组化,原位杂交、酶活性进行测定。
311 western Blot 分析。样本用SDS —PAGE 电泳分离, 等量的胞浆和膜蛋白应用于所有试验, 用PKC 亚型的对照肽确保抗体特异性,重组PKC 作为标准,免疫印迹用多克隆抗体。山羊抗鼠IgG与辣根超氧化酶结合被应用为次级抗体。化学发光检测和放射自显影被应用去鉴别PKC 转位。
312 免疫组化。用Zn —福尔马林混合液处理、石蜡包埋,做成5μm 切片。用鼠抗PKC 抗体作为初级抗体,应用于DaKo 染色前,用苏木精复染,检查组织。
313 原位杂交。切片做好后,检测mRNA ,选择多聚酶链反应探针,并用荧光素标记有意义和无意义探针,探针在37 ℃与组织杂交,杂交探针用抗荧光素初级抗体和LSAB2 检测系统检测。
314 酶活性。
311 western Blot 分析。样本用SDS —PAGE 电泳分离, 等量的胞浆和膜蛋白应用于所有试验, 用PKC 亚型的对照肽确保抗体特异性,重组PKC 作为标准,免疫印迹用多克隆抗体。山羊抗鼠IgG与辣根超氧化酶结合被应用为次级抗体。化学发光检测和放射自显影被应用去鉴别PKC 转位。
312 免疫组化。用Zn —福尔马林混合液处理、石蜡包埋,做成5μm 切片。用鼠抗PKC 抗体作为初级抗体,应用于DaKo 染色前,用苏木精复染,检查组织。
313 原位杂交。切片做好后,检测mRNA ,选择多聚酶链反应探针,并用荧光素标记有意义和无意义探针,探针在37 ℃与组织杂交,杂交探针用抗荧光素初级抗体和LSAB2 检测系统检测。
314 酶活性。
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