细胞提取总RNA检测RIN太低是什么原因？有什么方法解决

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解决时间 2021-12-31 06:55

提问者网友：听门外雪花风
2021-12-31 00:40

最佳答案

五星知识达人网友：行雁书
2022-01-22 05:26

RIN(RNA Integrity Number):RNA完整性计数,看你的RNA是不是完整,质量好不好,太低就说明降解严重~~~
其实提取RNA的条件没那么苛刻,在普通的通风橱里就可以操作,外源RNase的污染比较好消除,关键是破壁时的内源降解.如果用trizol法就必须考虑trizol的量.
另外,相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样.比如霍乱用trizol法提取效果极差,而沙门菌提取效果就较好；所以霍乱菌最好是用试剂盒过柱子提取,然后浓缩.我提取的是大肠杆菌,摸索了好几种方法,最后确定也是qiagen 的kit提取,然后浓缩.
另外,有一种可以喷的液体,叫做RNase抑制剂,用于消除表面RNase的污染,在客观条件不是很好的时候很有效.

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1楼网友：一秋
2022-01-22 06:26

RIN(RNA Integrity Number):RNA完整性计数，看你的RNA是不是完整，质量好不好，太低就说明降解严重~~~ 其实提取RNA的条件没那么苛刻，在普通的通风橱里就可以操作，外源RNase的污染比较好消除，关键是破壁时的内源降解。如果用trizol法就必须考虑trizol的量。另外，相同的方法提取不同细菌的RNA效果也不一样。比如霍乱用trizol法提取效果极差，而沙门菌提取效果就较好;所以霍乱菌最好是用试剂盒过柱子提取，然后浓缩。我提取的是大肠杆菌，摸索了好几种方法，最后确定也是qiagen 的kit提取，然后浓缩。另外，有一种可以喷的液体，叫做RNase抑制剂，用于消除表面RNase的污染，在客观条件不是很好的时候很有效。

2楼网友：梦中风几里
2022-01-22 06:02

控制内源性的rna酶，一般注意样品的保存要得当，液氮，低温，或则采用rnakeeper这一类的药剂保存。此外，提取过程中，研磨组织时液氮，和trizol(华越洋）等试剂成分对rna酶都有抑制作用。研磨时液氮要充足，裂解液一定要充足话句话说如果试剂要足，严格按照类似产品说明书，一般情况是1ml处理01g。对于外源性的rna酶的控制，首先保证实验环境的无rna酶话，台面，仪器，耗材，吸头，离心管等一定要处理，如果是用depc处理的话，一定要注意了，depc是致癌物质（建议考虑用致癌物depc替代品北京华越洋生物生产的，外源rna酶清除剂。稀释1000倍简单浸泡或喷洒处理上面的东西），其次一定要主要戴口罩和手套。加油！

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