Western blot转膜后marker很漂亮，丽春红s染色没有条带，做下去内参量很少

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解决时间 2022-01-01 05:10

提问者网友：欲望失宠
2021-12-31 18:53

最近在做Western，我的目的分子是20KD,内参是40KD的β-actin，Marker用的是pierce，胶用的是国内的预制胶8-16%的梯度胶，转膜是湿转，4度300mA恒流2h30min，NC膜，转膜完成后Marker很漂亮10条全出来了，但是用碧云天的丽春红染色后看不到蛋白条带或者很浅，之后β-actin 30ug条带很细，7.5ug基本就没有条带了。转膜后胶上无任何条带，膜上MARKER前后都能看见。蛋白提取是碧云天的RIPA（强），求高手解答。

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五星知识达人网友：等灯
2021-12-31 19:09

300mA电流过大，产热很厉害的，蛋白容易降解，建议用低电流转时间长一点。

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1楼网友：北方的南先生
2021-12-31 20:17

上样蛋白量太少吧再看看别人怎么说的。

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