PCR产物回收后，作为再次PCR的模板，为什么不可以？我反复扩增几次都失败了…

答案:3 悬赏:70 手机版

解决时间 2021-02-26 03:17

提问者网友：皆是孤独
2021-02-25 22:10

之前回收的都可以做模板的…

回收的模板单一，特异性好，也曾经稀释过1000倍，结果仍然一样无条带…

最佳答案

五星知识达人网友：舍身薄凉客
2021-02-25 23:26

那就说明这次的条带是非特异性条带呗你怎么就确定特异性好了不是只有一条就叫特异性好

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1楼网友：duile
2021-02-25 23:43

回收率地，你用回收DNA跑个电泳看看，特暗或啥都没有。你先别回收，直接用产物扩。

2楼网友：患得患失的劫
2021-02-25 23:37

你好！我想你是用高保真酶扩增的，那么高保真没产物一般都没有A尾巴，但是如果想要A尾巴做TA克隆，可以直接在PCR产物上加-A，体系是（PCR回收产物，Taq酶，水，dATP，Taq PCR buffer），直接72度延伸20min即可。如果你仍想继续以回收产物为模板，那么要先检测你的条带是否为目的基因或是否有回收到产物，如果是目的基因，那么用它做模板，浓度不需要太严格，你电泳检测一下再扩增试试。如有疑问，请追问。

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