RT-PCR融解曲线详解

RT-PCR融解曲线详解

融解曲线是荧光定量PCR仪出现后为了考察染料法结果的特异性产生的。大家使用荧光定量PCR的目的（也是荧光定量PCR的宣称优点）有快速、准确及无污染，其中快速的前提之一是不用跑电泳就可以通过扩增曲线考察初始拷贝数的量；准确是因为电泳是终产物，而通过扩增曲线我们知道，扩增最后达到平台期，这时不能真实反映未知样品的初始浓度，通过实验证明，扩增曲线的指数扩增期可以进行定量（Ct值）；无污染是电泳需要开盖操作，而荧光定量PCR通过扩增曲线就不需要跑电泳就可以定量了。融解曲线是由于染料法的特异性差，所以通过融解曲线考察扩增产物是否是目标产物，与电泳的其中的一个目的相同，但融解曲线毕竟是数学推导，并且结果中包含了仪器的误差（荧光信号中有系统误差），不如电泳能反映更多的实际的信息。所以实验时，如果采用染料法，融解曲线较好的话，如果实验条件不允许，可以不做电泳了，但如果融解曲线出现问题，借助电泳分析是一个很好的手段（有时扩增曲线显示没有扩增，但有电泳结果，可能的原因是设置问题或者染料、探针本省或者量的问题），个人认为比融解曲线更可靠。如果发文章，有融解曲线并且有电泳图，就比较完美了。

1. 你设置溶解曲线那一步骤了吗？要是没设，当然不会起峰。 2. 可能由于你的引物根本没有把目的片段pcr出来，自然也就没有峰。

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