反转录PCR中以第一链cDNA为模板合成第二链PCR时引物该怎么设，还有这个PCR的模板只有一条链为什么设

还有这个PCR的模板只有一条链为什么设上下游引物，并疑惑为什么一条模板也可以PCR？

1.第一次扩增后，cDNA不就变成两条了吗，从这里开始模版已经变成了两条链了。
2.从第二次扩增开始，已经和一般PCR没有区别了。所以还是参照普通PCR的条件

同学，从你问问题的情况我猜想你可能有些基本问题很含糊。 我试着分析一下。 1.首先pcr是体外大量扩增目的dna的技术。 你问模板dna是什么，这是不需要问的，你想扩增的目的基因是什么什么就是模板。你用cdna来做pcr模板当然是cdna双链了。（一定是双链） cdna做模板，引物当然不是cdna了，而是可以与cdna单链互补配对的一段寡核苷酸。（引鸡哗惯狙甙缴轨斜憨铆物是设计的） 总结一下 mrna是已经去除了内含子的→反转录出cdna单链→合成双链cdna→pcr，得到的大量cdna产物，相当于对真核生物dna的有用信息（我们想研究的信息---外显子）做了扩增。 2 mrna反转录不会丢失片段。真核dna转录初级产物是带内含子的，切除内含子后连接外显子就得到了mrna。 3 直接提取的真核dna做pcr，得到的是完整的dna产物。至于你问怎么得到目的基因，我不太能理解。首先你要知道你的目的基因是什么，你的目的基因是真核生物的完整dna，就用dna做pcr；目的基因是cdna就用cdna做pcr。 弄清pcr过程，原理，和一些名词，再看你的问题，你会发现根本不是问题。 没懂发站内信交流。 希望回答对你有帮助。

那是因为反转录酶的特性跟taq酶不一样啊，反转录的时候也是要加入N6或oligdT作为反转录引物的，确切的说反转录和PCR是不一样的两件事

引物是热稳定DNA聚合酶的结合位点，能够使子链合成时按照5’—〉3’的方向进行，不设置引物根本就没办法进行互补链的合成，因此尽管只有一条链也应该设置引物。一条模版合成了互补链后，在加热解链后，模板链和互补链均可再做下一次PCR合成的模版，按照指数增长方式快速的合成多个DNA。

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