ELISA中如何确定与抗原反应的一抗是饱和的?

答案:1 悬赏:20 手机版

解决时间 2021-11-09 11:37

提问者网友：ミ烙印ゝ
2021-11-08 12:40

最佳答案

五星知识达人网友：独行浪子会拥风
2021-11-08 13:41

将抗原做浓度曲线，如抗原量大于一抗量则出现钩状效应，也可将作标曲与抗原对比在哪个浓度
包被抗体浓度确定：
可通过棋盘滴定法进行测定，但用单项滴定法更为简便，其方法是将一抗进行一系列稀释包被微量反应板，再用一定稀释度的阳性参考血清和阴性参考血清进行孵育后洗涤，再加酶结合物进行反应，经孵育洗涤后，加底物溶液显色，终止反应后分别测定O.D值，选择O.D值≥1.0的那个一抗稀释度为最适包被浓度。一般总是要选择那个O.D值稍大于1.0，而不选择小于1.0的一抗浓度。阴性参考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求阳性参考血清和阴性参考血清的O.D值有明显差别。
包被的浓度过大会出现前带效应，浓度太小会出现后带效应（钩状效应）

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