转染sirna后做q-pcr 做出来结果没区别怎么办

转染sirna后做q-pcr 做出来结果没区别怎么办

1.siRNA转染后什么时候做qRT-PCR检测最好？

siRNA的沉默效果是有时效性的，在最佳的时间点观察，会得到更加明显的沉默效果，这个时间点的确定不能以同一株细胞转染DNA的经验确定，因为一个是消耗mRNA，一个是产生mRNA。对转染siRNA，在核酸水平，转染后8-48小时，即可观察到mRNA水平的逐步下降，一般来说，转染后48小时进行qRT-PCR检测通常会得到漂亮的结果。

2.siRNA转染后什么时候做蛋白检测(如Western Blot)最好？

在mRNA水平下降后，接下来才会有蛋白水平的下降，一般来说，转染后48-72小时进行蛋白检测通常会得到较好的结果

EntransterTM-R4000是英格恩生物（Engreen Biosystem）最新研发合成的针对siRNA、microRNA、mimic、inhibitor、mRNA和shRNA等RNA的转染试剂。EntransterTM-R4000不仅可以转染小RNA，而且针对mRNA等长链RNA优化。由于纳米技术的应用，EntransterTM-R4000能做到高达90%的转染效率和60-90%的沉默效率，对难转染细胞和原代细胞也非常适用。

适用范围

●小RNA转染。包括siRNA转染，miRNA，mimic，inhibitor等。

●长链的mRNA和shRNA转染，针对mRNA和长链的shRNA等RNA转染优化。

●可转染动物细胞、昆虫细胞等，也可以转染原代细胞、悬浮细胞和原代细胞等传统难转染细胞。 

主要特点

●最新转染试剂，纳米聚合物，转染效果优于脂质体转染试剂

●高效转染，沉默效率高，可以达到90％以上的沉默效率

●低细胞毒性，有血清转染，无须反复更换培养基

●原代细胞、悬浮细胞和敏感细胞都能转

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