western blot跑不出条带，是什么原因啊？

western blot跑不出条带，是什么原因啊？

1、跑胶 电泳Buffer重复利用的时候要注意，不能混浊，有时候能用个3－4次，有时候第二次都不行了，事先前预电泳一下，看看气泡的均匀度；Buffer一定要淹过梳子孔，否则就会发现今天的蛋白不会跑；跑的时候先用低电压跑过浓缩胶，再换高电压跑分离胶，不要追求速度，慢慢跑条带会分离的更好，特别是对于高分子量的目的蛋白；
2、转膜 湿转，Buffer一定要预冷，最好提前一天配好放4度；滤纸不要大过PVDF膜，防止短路；胶在负极，膜靠近正极，放入Tank前检查一遍会使你免以体会放反的痛心疾首；膜要标记好正反面；转膜过程中，经常过去看看，防止意外，如电泳仪接触不好。

顺带一提，步骤一样不一定成功的，有时候是操作不到位所致

估计是转膜的问题，因为你有时候有条带，说明抗体是好的。你看看转膜的时候有什么问题，是不是膜和胶之间有气泡什么的。
额。。。这，你看看上抗体的时候是不是摇床上摇的够匀，另外，延长一下上抗体的时间试试

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