western杂交出现分子量大于和小于预期蛋白的条带'原因是什么啊'?

western杂交出现分子量大于和小于预期蛋白的条带'原因是什么啊'?

实际上来说,Western并不能对蛋白质的分子量进行测定,它只是利用一抗二抗显色的步骤从凝胶上定性找到某一蛋白质.所以分子量大小还是在于电泳的过程.首先,从电泳的原理上讲,它通过带电基团在电场中的移动来测定分子量,蛋白质的构象（空间形态）对这个影响很大,球蛋白就会比线形蛋白显的分子量小.而且marker同样有这个问题.另外,对于western来说,多数都是从生物体中（细胞裂解液）做全蛋白电泳,然后特异性检测某一蛋白的存在,正因如此,蛋白质的一级结构就显的很重要了,毕竟你的预期蛋白是唯一的,而生物表达的蛋白可能就会存在或多或少的差异,分子量自然也就不会完全匹配预期.======以下答案可供参考======供参考答案1:很正常啊！抗体是别的只是目的蛋白上一小段序列，也就是俗称的抗原决定簇，这一小段序列其他蛋白也可能有，western的好处是结合了特异性识别加上分子量，这样就可以比较准确了，因为两个蛋白同时分子量相同又含有相同抗原决定簇的几率会非常小，所以western是生物学中一种金标准方法，相对免疫组化只能作为参考，没有western的结果，免疫组化的结果就不准确

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