各位高手，请教一下，我做质粒的单酶切、与目的片段连接、转化，老是没有菌长，转化过程、感受态没问题，

各位高手，请教一下，我做质粒的单酶切、与目的片段连接、转化，老是没有菌长，转化过程、感受态没问题，

你确定转化过程和感受态没问题吗？有没有做过平行的其他转化对照？如果别的质粒可以转进去，并且生长，则确实说明你的转化过程和感受态没问题。
如果是这种情况，那么问题有可能是在酶切后回收这一步。回收后的DNA质量直接影响到之后的T4连接酶作用和细菌转化。包括酶切回收buffer没有洗脱干净，或者留有酒精（对连接酶来说是比较致命的一点），或者最后的溶解buffer的酸碱值有问题，都会影响到细菌接受质粒的。建议你重新换一个酶切回收试剂盒。并且每一步都做好平行对照。查找出问题所在。
百替生物专业提供克隆构建服务。有需要也可以寻求公司的帮助。

你直接拿没有切的质粒去转化涂板 看有没有长 如果长了就是连接的问题 如果没长就是感受态的问题

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