长pcr引物设计以及扩增条件

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解决时间 2021-02-27 18:37

提问者网友：饥饿走向夜
2021-02-26 22:56

长pcr引物设计以及扩增条件

最佳答案

五星知识达人网友：思契十里
2021-02-26 23:55

引物长度和专一性
常见的引物长度为18-30个碱基。短的引物（≤15碱基）能非常高效地结合, 但是它们的专一性不够。较长的引物能提高专一性，然而退火效率低，从而导致PCR产量低下。同时应避免编码单一序列和重复序列的引物。
平衡GC含量，避免GC-和AT-富集区域
引物的GC含量应介于40%～60%之间。应避免聚-（dC）-或聚（dG）-区域，因为它们会降低退火反应的专一性。聚-（dA）-和聚（dT）-也应避免，因为这样会形成不稳定的引物-模板复合物，从而降低扩增效率。

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1楼网友：渊鱼
2021-02-27 02:54

引物设计遵循常规就可以，注意别太短，还有尽量减少错配；扩增程序可以看说明，5~8K没问题，不难扩增，注意算好延伸时间就好，我之前做过一段20K左右的扩增，如果您实验中有问题可以再联系我私聊。

2楼网友：白昼之月
2021-02-27 01:31

如果实验室有钱直接给公司做primer walking就行

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