【TRIZOL】求TRIZOL提取RNA的详细步骤

答案:2 悬赏:30 手机版

解决时间 2021-03-02 08:58

提问者网友：雾里闻花香
2021-03-01 12:42

最佳答案

五星知识达人网友：怀裏藏嬌
2021-03-01 13:08

【答案】厚百提供：
　　1、在提取组织RNA时,每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10
　　╳106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞.
　　2、将组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；在EP管中,按照每1ml
　　TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15秒,在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后,12000g（2℃～8℃）离心15分钟.
　　3、取上层水相置于新EP管中,按照每1ml
　　TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟.
　　4、按照每1ml
　　TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤,涡旋混合,7500g（2℃～8℃）离心5分钟,弃上清；让沉淀的RNA在室温下自然干燥；用Rnase-free
　　water
　　溶解RNA沉淀.
　　Ps:在收集到生物材料之后,最好马上进行RNA制备工作.若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜.在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用.

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1楼网友：迷人又混蛋
2021-03-01 14:20

这下我知道了

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