如何进行pcr检测的重复性试验

如何进行pcr检测的重复性试验

我自己反转录的cDNA也扩不出，于是就想办法：基因特异引物我换了两条，pcr 退火温度我从44度试到60度，Mg+离子浓度我做过梯度……各种条件我都尝试过，结果是现在我可把自己反转录的cDNA扩的很亮，但就是扩不出公司的。二次PCR我也试过，没有效果。我不知到为什么重复不出来，现在，搞的我怀疑 一切：PCR仪器的效率不稳定，PCR反应产物降解，电泳，加样手法，理论……我都快受不了了。

1.基于已有答案的陈述，生物实验因为操作、环境、实验对象复杂性等原因的确重复性不如物理或者化学实验好。比如对复杂模板的PCR是很难保证每次都能成的（满脸都是泪深受其害），以及某些细胞上的实验受细胞状态、细胞来源等的影响都很大（满脸都是泪深受其害），人艰不拆就不往下说了```
　　2.任何科学实验，可重复性都是必须要强调的。可重复性不好不能与不能重复画等号。作为@海布里炮兵 老师所描述的那种渣操作选手，我的很多实验都重复了两次以上。
　　3.如果有人以“生物实验可重复性不好”为由来解释其论文结果无法重复的问题，那他多半心里有鬼。
　　请你参考！

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