固定、脱水后的冷冻切片如何做HE染色?

具体是组织多聚甲醛固定，蔗糖水脱水后进行冷冻切片，然后如何操作HE染色？

染色流程
　　(1)二甲苯（Ⅰ） 15min 　　(2) 二甲苯（Ⅱ） 15 min 　　(3)100%乙醇（Ⅰ） 5min 　　(4)100%乙醇（Ⅱ） 5 min 　　(5)80%乙醇 5min 　　(6)蒸馏水 5 min 　　(7)苏木精液染色 5 min 　　(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s 　　(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s 　　(10) 稍水洗 10-30 s 　　(13)蒸馏水过洗 1-2 s 　　(14) 0.5%伊红液染色 1-3 min 　　(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s 　　(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s 　　(17) 95%乙醇（Ⅰ） 2-3 s 　　(18) 95%乙醇（Ⅱ） 3-5 s 　　(19) 无水乙醇 5-10 min 　　(20) 石炭酸二甲苯 5-10 min 　　(21) 二甲苯（Ⅰ） 2 min 　　(22) 二甲苯（Ⅱ） 2 min 　　(23) 二甲苯（Ⅲ） 2 min 　　(24) 中性树胶封固 　　注：①第（10）、（11）步可省去，（12）步冲水时间需延长至20-30min。 　　②第（20）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。 　　* 冷冻切片HE染色步骤： 　　（1）冰冻切片固定 10～30 s 　　（2）稍水洗 1～2 s 　　（3）苏木精液染色（60℃） 30～60 s 　　（4）流水洗去苏木精液 5～10 s 　　（5）1%盐酸乙醇 1～3 s 　　（6）稍水洗 1～2 s 　　（7）促蓝液返蓝 5～10 s 　　（8）流水冲洗 15～30 s 　　（9）0.5%曙红液染色 30～60 s 　　（10）蒸馏水稍洗 1～2 s 　　（11）80%乙醇 1～2 s 　　（12）95%乙醇 1～2 s 　　（13）无水乙醇 1～2 s 　　（14）石炭酸二甲苯 2～3 s 　　（15）二甲苯（Ⅰ） 2～3 s 　　（16）二甲苯（Ⅱ） 2～3 s 　　（17）中性树胶封固。 　　注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。 　　染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。 　　4．12 切片脱水透明 切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。

首先，固定使标本中蛋白质等物质变性，在后期处理中，不会改变形态及性质；脱水：在用石蜡包埋使，如果标本中含有水，石蜡就不能浸入标本中，所以，脱水一方面是使下一步包埋石蜡浸入标本，另一方面是为了染色，水会使染色剂稀释或失色；包埋：在切片时，之所以标本能够切成薄薄的一片，就是标本中浸入了石蜡，有了与石蜡相似的性质，能够切成很薄的一片；染色是为了用显微镜观察标本，如不进行染色，在标本切成很薄的片后，在显微镜下是透明的，不能观察。

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