载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？

载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗？

cicelyzh(站内联系TA)要根据距离和哪种限制酶的情况而定。有些能切开，有些不行。jwucn(站内联系TA):hand:..........................帮您顶一个...................................:hand:zqxabc(站内联系TA)可以的，临近的两个酶切位点可以分步酶切，一个一个切，先切一个，然后不跑胶直接加Binding buffer过柱洗脱，回收产物再进行下一个酶切。因分步酶切有损耗，所以质粒的量可以增加以保证回收浓度joan198108(站内联系TA)尽量不要，临近位点可能导致一个酶的结合影响另一个酶的结合，还有就是有些酶需要的结合片段较长，分步酶切后也不一定能够实现山水88(站内联系TA)可以的话把序列放上来大家给你分析吧...山雨(站内联系TA)这样子不好，酶切的效果好需要一定长度是保护碱基，挨着的位点切不动，分步切的话，buffer不一样，效果也非常一般，建议在引物上加酶切位点，这样就不受载体的限制了。cory0931(站内联系TA)on yr re:
质粒的两个酶切位点，紧挨着的话，势必会影响双酶切效果，原因是：
内切酶结合时，一般都是需要微点周围有多余碱基，否则影响结合；
再者，酶切后的粘性末端不余怒重合；
若是连个酶切位点之间有几个碱基的间隔，比如说6个以上，一般是可以的；
至少，也得间隔4个碱基吧；

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