PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接
答案:1 悬赏:10 手机版
解决时间 2021-10-15 13:41
- 提问者网友：疯子也有疯子的情调
- 2021-10-15 00:35
PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接
最佳答案
- 五星知识达人网友：躲不过心动
- 2021-10-15 02:12
已经得到扩增的目的基因片段和克隆载体→对两者分别进行酶切（选要相同的限制性内切酶对两者进行切割）→酶切产物经琼脂糖凝胶电泳回收→克隆载体和目的基因进行连接（一般选用T4连接酶）→大肠杆菌感受态细胞的制备（常见的有氯化钙法）→转化（将重组载体导入感受态细胞中）→将上一步得到的大肠杆菌进行涂板，倒置培养18-20个小时→筛选和快速鉴定（直接挑取单克隆菌落，进行菌落PCR，电泳检测PCR产物，挑取阳性克隆的菌落）
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