我要扩增某个物种中的一个酶的基因，该如何设计实验？怎么获得在某个物种中该酶的基因，谢谢！

答案:3 悬赏:10 手机版

解决时间 2021-11-21 06:35

提问者网友：且恨且铭记
2021-11-20 06:52

最佳答案

五星知识达人网友：不想翻身的咸鱼
2021-11-20 08:06

1.目的菌株的这个酶的基因是不知道，我是查的其他物种的该酶的基因，是根据我查的酶的基因直接设计引物吗？这个的话可以根据其他物种设计兼并引物，要是嫌费事可以利用和他关系最近的物种设计引物，一般都可以扩出来
2.是做菌落PCR呢，还是做像你所说的先提取该物种的RNA，然后再通过RT-PCR的方法扩增？

要先提取该物种的RNA，然后再通过RT-PCR的方法扩增，然后再涉及到菌落pcr追问谢谢你^-^我下来试试

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1楼网友：想偏头吻你
2021-11-20 09:18

1. 在GeneBank等数据库中查到该酶的cDNA序列
2. 从编码区的起始密码子atg开始设计正向引物，终止密码子tga/taa/tag处设计反向引物（具体设计方法...就不多说了...21bp左右）
3. 收集该物种的RNA，通过RT PCR的方法得到cDNA
4. PCR的方法将目的基因P出来即可追问目的菌株的这个酶的基因是不知道，我是查的其他物种的该酶的基因，是根据我查的酶的基因直接设计引物吗？
是做菌落PCR呢，还是做像你所说的先提取该物种的RNA，然后再通过RT-PCR的方法扩增？

谢谢^-^

2楼网友：鱼芗
2021-11-20 09:08

通过另一个物种的酶的氨基酸序列比对，找出在目的物种中与其最同源的序列，然后对该序列进行扩增，通过后续实验进行验证。

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