双酶切质粒后电泳的问题

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解决时间 2021-02-23 07:32

提问者网友：疯孩纸
2021-02-23 02:50

双酶切质粒后电泳的问题

最佳答案

五星知识达人网友：鸠书
2021-02-23 04:20

很显然是质粒发生了自连啦。切开的2个质粒连起来了，因此相当于2个质粒的大小。你需采用磷酸化避免自连发生。

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1楼网友：躲不过心动
2021-02-23 06:58

双拷贝质粒，

2楼网友：几近狂妄
2021-02-23 05:41

请首先检查酶切前空载体的大小。最好先在KpnI单切以后，BglII二次酶切前，先检测一下，确认质粒的实际大小；确认无误了再进行BglII二次酶切。分段进行验证排查。
单纯的酶切后没有连接酶时，能引发自连的说法，理论上也许有；不过从我的7,8年的实验经历中，从来没有听说过谁真的出现过，更是从来没有见过。
从我以往的经历出发，最可能出现的问题就是使用了错误的质粒，或者质粒中有所不知道的外源序列。一般情况下我会依照质粒图谱，对质粒进行酶切或者PCR确认。甚至是抽质粒时出现的基因组碎片污染都有可能。

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