RNA质量不好请问能继续做定量PCR吗

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解决时间 2021-02-11 01:37

提问者网友：半生酒醒
2021-02-10 09:17

RNA质量不好请问能继续做定量PCR吗

最佳答案

五星知识达人网友：你哪知我潦倒为你
2021-02-10 10:52

RNA质量不好请问能继续做定量PCR
1.其实反转录要求不是很高,所有器具消毒操作带手套口罩就行,没必要加RNaseInhibitor
2.OD260/280实际上反应的是蛋白质杂质的比例,可以间接的反应有没有RNA酶污染,所以这个比值低了有可能是RNA酶污染,也可能是提取操作或者试剂问题导致蛋白质残留过多.
做普通跑胶比值要求高一些在1.80-2.20之间；如果做实时定量要求就会低很多,1.5我都做过,影响不是很大,总量少不怕,就怕有差异,关键是点样不容易均一,因为实时定量非常敏感,很小的差异都会放大N倍,一般就靠增大总反应体积来减少误差,30-50微升的时候由操作带来的误差会大大减少,而很多人用的10微升体系做10次能有2次正常结果就不错了.

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1楼网友：詩光轨車
2021-02-10 12:00

一般提取组织后测rna的浓度，然后反转录的时候保证reaction mixture里面rna的量是一样的。然后你反转录成了cdna。这个时候不必要测浓度。因为你的反转录体系都是一样的，理论上讲（建议用multipipetide）你生成的cdna也是一样的 rt-pcr有两种解释，一是指real time-pcr，即实时pcr；另一种是指reverse transcription-pcr，即反转录pcr。要判断文献中所说的rt-pcr是指实时pcr还是指反转录pcr，可以看反应体系中的模板，如果是dna或cdna，那就是指实时pcr；

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RNA质量不好 请问能继续做定量PCR吗

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