质粒进行定量时，有必要区分是环状还是线性DNA吗

质粒进行定量时，有必要区分是环状还是线性DNA吗

（1）质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团．从图1可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团．
（2）DNA分子的一条多核苷酸链中，两个脱氧核苷酸之间以磷酸基团和五碳糖相连．由题目可知，SmaⅠ识别的DNA序列只有G和C．
（3）用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒来重组质粒，其结果是目的基因与抗性基因被破坏．
（4）将游离末端重新结合形成DNA使用的是连接酶，获得的环状DNA可能有：原质粒切割的粘性末端重新连接；目的基因的粘性末端连接而成环状；目的基因与切割质粒形成重组质粒．
（5）如果使用BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒，比用EcoRⅠ酶切割的优点是：避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化．
（6）导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存，因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加抗生素的培养基培养．

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