从转录组测序结果中得到一基因预测的CDS，pcr后测序获得orf的后半段，怎么得到前半段？
答案:2 悬赏:10 手机版
解决时间 2021-03-16 04:49
- 提问者网友：城市野鹿
- 2021-03-15 11:00
转录组测序给的貌似是完整的orf，全长1600bp左右，在该orf的两端设计引物pcr，产物直接拿去测序，结果orf的后半段1100bp左右序列与转录组测序结果一致，但前半段ATG后面400bp左右的序列不对，下面该怎么做才能得到完整的orf呢？我是新手，希望耐心指教
最佳答案
- 五星知识达人网友：迷人又混蛋
- 2021-03-15 11:46
你先设计一段前半段的引物看看到底有没有正确的那部分序列吧。。
全部回答
- 1楼网友：逐風
- 2021-03-15 12:55
qrt-pcr的引物设计使用cds，最好扩增的片段能包含一个内含子剪切位点，这样可以通过电泳排除扩增基因组dna的可能性，让定量pcr更准确
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