如何鉴定单酶切目的片段连接的方向
答案:1 悬赏:60 手机版
解决时间 2021-03-11 11:46
- 提问者网友：喧嚣尘世
- 2021-03-10 14:41
如何鉴定单酶切目的片段连接的方向
最佳答案
- 五星知识达人网友：冷風如刀
- 2021-03-10 14:47
常用的方法：
1）酶切，选择酶有一定的技巧，用插入片段自身的一个酶切位点（当然不要选择正中间的，尽量偏一点，比如片段是1Kb，选择200bp处的或800bp处的）和载体插入片段一侧的酶切位点，通过检测切出来的片段大小来确定插入方向。
2）PCR，用你目的片段的引物配上载体上的引物，目的片段正向引物与载体反向引物配对，能P出来即正向插入，目的片段正向引物与载体正向引物能P出来则是反向插入。
仔细想想，这两个是最简单最方便的方法了。
1）酶切，选择酶有一定的技巧，用插入片段自身的一个酶切位点（当然不要选择正中间的，尽量偏一点，比如片段是1Kb，选择200bp处的或800bp处的）和载体插入片段一侧的酶切位点，通过检测切出来的片段大小来确定插入方向。
2）PCR，用你目的片段的引物配上载体上的引物，目的片段正向引物与载体反向引物配对，能P出来即正向插入，目的片段正向引物与载体正向引物能P出来则是反向插入。
仔细想想，这两个是最简单最方便的方法了。
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