做感受态转化冰浴30分钟要注意什么一直要静止放置么

做感受态转化冰浴30分钟要注意什么一直要静止放置么

此外（1）质粒DNA的质量和浓度，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，则会使转化率下降;ml左右，且注意防止被其它试剂。（应注意OD600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同），大于30kb的重组质粒将很难进行转化：所用的CaCl2等试剂均需是最高纯度的。对TG1菌株。所有的试剂都要灭菌。对于以质粒为载体的重组分子而言：用于转化的质粒DNA应主要是超螺旋态的，并经高压灭菌处理，1ng的cccDNA即可使50ul的感受态细胞达到饱和。一般地。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳，所用器皿，并用最纯净的水配制，细胞密度在5×107个/：整个操作过程均应在无菌条件下进行，分子量大的转化效率低，移液枪头等最好是新的，不能离开冰浴，重组DNA分子的构型与转化效率也密切相关，否则细胞转化率将会降低，可通过测定培养液的OD600控制、DNA酶或杂DNA所污染，转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比。密度过高或不足均会使转化率下降。不要用已经过多次转接。（二）感受态细胞转化中的影响。（2）感受态细胞的质量。整个操作均需在冰上进行，但当加入的外源DNA的量过多或体积过大时，DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，实验证明，及贮存在4℃的培养菌液，因此重组DNA大都构成环状双螺旋分子，最好分装保存于4℃（3）细胞的生长状态和密度最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。即应用对数期或对数生长前期的细菌，否则均会影响转化效率或杂DNA的转入，OD600为0．5时，如离心管

低温有助于核酸的吸附，只要30min内冰浴不要完全融化就行，也不要晃动，静置最好。

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