荧光定量pcr里的相对定量里算delta deltaCt的对照组是什么？

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解决时间 2021-03-03 15:18

提问者网友：咪咪
2021-03-02 20:35

是之前浓度稀释了之后用来做标准曲线算扩增效率的那个吗？

还是从实验样品中选择一个出来当参照

最佳答案

五星知识达人网友：英雄的欲望
2021-03-02 22:08

你都有标准曲线了。就不用做delta deltaCt了，直接用样本的ct值带入标准曲线就可以了。

delta deltaCt只用于相对值的测量。每一个delta代表ct值相减一次。第一次是目标基因对照组和实验组的ct值相减。第二次是内参基因对照组和实验组ct值相减。
得到的两个数值算为2的XX次方，就是相差了多少倍。再用目的基因的倍数除以内参基因的倍数，最后得到实际的相差倍数。

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1楼网友：枭雄戏美人
2021-03-02 23:02

看了你空间里的溶解曲线，你可以看到溶解峰的温度都很低，全在80以下，你扩出来的东西多半只是引物，你跑定量的时候有做ntc的孔吗，如果有做，可以对照ntc组和加了模板的组，溶解峰还是一样的话，那你扩出来的产物100%是引物了。再有，你的扩增曲线问题，ct太了，一般做定量认为ct=25时，是一个模板扩出来的，所以当大于25扩出来的结果都不可信。还有，你反转录的时候rna加多少，2微克？，反转录体系是多少,20微升？反转录之后按照多少比例稀释，1比4？总之，问题可以再问详细一点，也可以直接hi我如果做过ntc那溶解峰就没问题了，而且都很单一，特异性蛮好的。没稀释的cdna做的定量，ct大于30？你p的什么基因呢，表达量也太低了吧，内参的ct呢，也是这么低吗

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