【求助/交流】目的基因与表达载体连接时有哪些要点？

答案:1 悬赏:50 手机版

解决时间 2021-02-12 17:15

提问者网友：沉默菋噵
2021-02-11 16:44

最佳答案

五星知识达人网友：舍身薄凉客
2021-02-11 17:02

2.片段和载体酶且要完全，确定大小没问题
不过有些载体本身就很很难连接！
建议在连接时，先加入载体和目的基因，85度热浴15min,除去残留的酶和未纯化干净的杂蛋白。然后再加入酶和BUFFER。
适当延长连接时间24小时以内都没问题的！
如果还是不行，就试试对载体去磷酸化，每一步处理都要在结束后热变性，失活残留的酶，适当加大目的基因的量（10以内），连接温度也可以在4-16度内用PCR做个梯度！不过如果有平末端的，就不用做这个梯度了。dfdxhghg(站内联系TA)我们只做医学论文，所以更专业！我们全部的工作人员均来自医学院校和附属医院，全部拥有硕士以上学历，有丰富的论文写作经验。做医学论文，我们有比其他公司无法比拟的优势！很多论文公司的人员根本不懂医学，医学论文等专业知识上面很难沟通和探讨。

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