pcr 引物特异性不好怎么办

答案:4 悬赏:20 手机版

解决时间 2021-02-24 02:04

提问者网友：刺鸟
2021-02-23 15:30

pcr 引物特异性不好怎么办

最佳答案

五星知识达人网友：十鸦
2021-02-23 16:54

先blast一下，引物特异性不好再改变条件也没意义
引物GC% 5‘端或中间高3’低，3’端5个碱基内尽量不要有连在一起的CG且少于3个。
引物不要在串联重复区，比如Alu上
如果引物没有问题，可以减少引物浓度（100nM)，酶的的用量(1U/50ul)，增加模板和提高退火温度
退火温度最好在设计时统一，这样实验更方便，一般pp5上tm55度可以60度退火，上下游引物tm不要差的太多

全部回答

1楼网友：十鸦
2021-02-23 19:22

提高退火温度

2楼网友：千夜
2021-02-23 17:55

增加引物长度，提高退火温度。

3楼网友：深街酒徒
2021-02-23 17:27

最简单就是重新设计（个人感觉）
如果LZ只是用来扩增，也可以跟LS几位说的一样提高退火温度试试看，如果还要用来测序那么建议LZ还是重新设计个比较保险。

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