RT-PCR做不出来

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解决时间 2021-02-15 10:58

提问者网友：几叶到寒
2021-02-15 05:20

我是一个新手，我现在在做反转录，在PCR，可是我扩了好几次，就是做不出什么，我排除了试剂的问题，就是手法问题，希望高手指教一下

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五星知识达人网友：傲气稳了全场
2021-02-15 05:56

建议你先找一现成的DNA模板及相应的引物，然后做PCR，如果做出来了说明PCR体系没有问题。那问题就可能是出在反转录上了，RNA提取好之后可以跑个电泳或者检测OD值，以确认RNA提取是否成功。另外，检查是否用错反转录引物？针对不同的RNA样本类型要使用不用的反转录引物，病毒细菌之类的用随机引物作反转录引物，动植物RNA用OligodT（我们实验室用17个T的引物）作为反转录引物。

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1楼网友：洎扰庸人
2021-02-15 07:17

actin如果都扩不出来那不是反转有问题就是rna已经降解了。建议检查这两步的样品。建议检查程序，重新反转，如果还是扩不出来的话，重新抽rna,再不行，回家过年吧。

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