载体pet28a构建重组质粒，测序准确，转至BL21原核表达蛋白，，怎么也诱导不出来？同批次的BL21别人能诱导
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解决时间 2021-03-29 04:15
- 提问者网友：绫月
- 2021-03-28 12:06
载体pet28a构建重组质粒，测序准确，转至BL21原核表达蛋白，，怎么也诱导不出来？同批次的BL21别人能诱导
最佳答案
- 五星知识达人网友：愁杀梦里人
- 2021-03-28 13:33
1 可能是太弱你看不出来，建议用His抗体做个western 看看是不是有条带而看不出。
2 是不是融解性太差，建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体
2 是不是融解性太差，建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体
全部回答
- 1楼网友：行路难
- 2021-03-28 14:46
有可能是表达量太小，先做个WB验证下
IPTG浓度感觉有点大，我们实验室最大不超过1mM,一般是0.2mM。
如果可以还是换个载体，感觉28a不怎么好纯化
IPTG浓度感觉有点大，我们实验室最大不超过1mM,一般是0.2mM。
如果可以还是换个载体，感觉28a不怎么好纯化
- 2楼网友：人類模型
- 2021-03-28 14:28
换个载体试试，是经常有这种情况的，怎么表达都表达出来，换个载体就表达出来了，你可以试下
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